Diamant SP Mustang
Résine échangeuse de cations forte haute résolution
Instruction d'utilisation
Introduction
La chromatographie d'échange d'ions (CEI) est une méthode très efficace pour la séparation et la purification de biomolécules. La méthode repose principalement sur l'interaction entre les charges positives et négatives, et utilise les propriétés de charge et les différences de différentes molécules biologiques dans des conditions spécifiques pour les séparer. Il a les caractéristiques d'une charge élevée, d'une bonne résolution, d'un état contrôlable et d'une mise à l'échelle facile. Il a été largement utilisé dans la médecine, l'industrie chimique, la métallurgie, l'alimentation et d'autres domaines.
La résine IEC est composée de trois parties : (1) matrice d'agarose réticulée, qui présente les caractéristiques de stabilité chimique poreuse, hydrophile et bonne ; grâce à la modification des molécules d'agarose traditionnelles, il possède des propriétés mécaniques plus fortes, appelées agarose hautement rigide, à savoir la matrice Diamond; (2) Des groupements fonctionnels fixés à la matrice, qui sont des groupements chargés électriquement, déterminant les propriétés de la résine IEC ; (3) Un ion (appelé ion d'équilibre) qui a une charge opposée au groupe fonctionnel et peut être lié de manière réversible au groupe fonctionnel. Diamond SP Mustang est une résine échangeuse de cations forte formée en couplant du sulfopropyle à une microsphère d'agarose fine et très rigide avec une résolution plus élevée que Diamond SP, qui convient à une purification fine ou moyenne dans l'étape de chromatographie.
Caractéristiques techniques
| Aspect | Boue blanche, peut être stratifiée |
| Matrice | Agarose à haute rigidité |
| Groupe fonctionnel | Sulfopropyle |
| Taille moyenne des particules+ | 36-44μm |
| Capacité ionique totale | 130~160μmolH |
| Charges dynamiques | > 70 mg de lysozyme/mL de résine > 95 mg de BSA/mL de résine |
| Pression maximale | 0.5 MPa |
| Débit max | 450cm/h(0.5MPa, BXK100/500, H=20cm, 20 ℃) |
| Stabilité chimique | Stable dans les tampons aqueux courants : 1M NaOH++,1M HAC++,70% éthanol, éthanol à 20 %, GuHCl 6 M, urée 8 M, thioglycérol 100 mM + 25 mM Tris pH 8.5, acide citrique 0.1 M + urée 8 M + NaCl 1 M pH 2.5 Eviter le contact avec les agents oxydants, les détergents cationiques. |
| Stabilité du pH | 3~14(CIP), 4~12 (Travail) |
| Tolérance de température | 2 ~ 40 ℃, ne peut pas geler, peut tolérer une stérilisation à haute pression de 121 ℃ (PB 50 mM, pH 7) |
| Stockage | 2 ~ 30 ℃, 20 % d'éthanol avec 0.2 M NaAc |
| Débit recommandé | 100~300cm/heure |
+ La taille moyenne des particules est la taille des particules de résine accumulée de la distribution du volume de garnissage
.++1M NaOH et 1M HAc ne doivent être utilisés que pour le nettoyage.
Méthode de chromatographie
3.1 Garniture de colonne
Remarque：Il est préférable d'équilibrer la bouillie de résine à température ambiante avant le remplissage de la colonne.
- Selon le volume de la colonne pour calculer la quantité de résine.
Volume de résine = volume de colonne × 1.15 (facteur de compression = 1.15) Selon le volume de résine de décantation requis, la suspension en suspension de la résine requise est calculée comme suit :
Volume de bouillie de résine 1 requis = Volume de résine de sédimentation ÷ Concentration de bouillie de résine 1. La concentration d'origine de la bouillie de résine 1 est indiquée dans le tableau suivant.Taille du paquet Concentration de boue de résine1 (%) 25mL、100mL、500mL、1L、5L、10L 80 20L, 40L 75 1 : Il s'agit de la suspension de résine d'emballage d'origine vendue par Bestchrom.
Remarque : Pour les emballages non originaux, le client peut calculer le volume requis en fonction de la concentration réelle de la suspension de résine. - Lavage de la résine : suspendre la résine en agitant et verser dans un entonnoir, retirer le liquide et laver 3 fois avec environ 3 mL d'eau distillée/mL de résine. Utilisez un bâton de verre ou un agitateur pour remuer chaque fois que vous ajoutez de l'eau distillée, afin de mieux nettoyer la solution de stockage.
- Préparez la bouillie d'emballage : déplacez la résine lavée de l'entonnoir dans un bécher ou un autre récipient approprié, et ajoutez de l'eau distillée pour obtenir une concentration de bouillie de 50 % à 75 %, remuez bien et mettez de côté pour l'utiliser.
- Prenez une colonne BXK nettoyée (les colonnes de la série BXK avec des diamètres allant de 1 cm à 30 cm peuvent satisfaire différentes applications de chromatographie à l'échelle). Prenez BXK16/20 par exempleample, purger les bulles emprisonnées au niveau du filet de l'embout en drainant un peu d'eau distillée par la sortie de la colonne. Laisser environ 1 cm d'eau au fond de la colonne et fermer la sortie inférieure. Ajustez la colonne pour qu'elle soit perpendiculaire au sol.
- Verser lentement la bouillie dans la colonne en une seule fois (utiliser un réservoir de garnissage si nécessaire). Ne pas amener de bulles d'air dans la colonne. Réservoir de remplissage : Tube en verre vide de même diamètre que la colonne BXK.
- Remplir le reste de la colonne avec la solution de remplissage. Connectez le réservoir de garniture au système de chromatographie, ouvrez le débit, drainez les bulles dans le tuyau, fermez le débit et serrez le couvercle supérieur du réservoir de garniture.
- Après avoir versé, remuez bien à nouveau avec un agitateur, puis lavez les particules de résine sur la paroi interne de la colonne de haut en bas avec la solution de garnissage, et laissez la résine se déposer naturellement jusqu'à ce qu'il y ait environ 1 cm de solution clarifiante sur la suspension.Montez l'adaptateur et connectez l'adaptateur au système de chromatographie ou à la pompe péristaltique. Abaissez l'adaptateur pour descendre au contact de la solution clarifiante et serrez la bague d'étanchéité après qu'elle soit complètement immergée dans la solution clarifiante. Avec la sortie de la pièce supérieure ouverte, déplacez lentement l'adaptateur vers le bas jusqu'à ce que toutes les bulles soient évacuées.
Remarque : Cette opération n'est applicable qu'aux colonnes BXK 100 et supérieures. Le rinçage de la paroi interne réduit les particules de résine collées entre la bague d'étanchéité et la paroi de la colonne, évitant ainsi le risque de fuite. - Lorsque la hauteur du lit est de 10 cm, le débit peut être réglé sur 600 cm/h. Ouvrez la sortie inférieure, démarrez la pompe et faites fonctionner le débit de réglage jusqu'à ce que le lit soit stable. Marquez la hauteur du lit.
- Retirez le réservoir d'emballage (le cas échéant), abaissez l'adaptateur à environ 0.5 cm au-dessus de la surface de la résine et continuez à appuyer sur la colonne en utilisant le débit ci-dessus jusqu'à ce que le lit soit complètement consolidé, en marquant la hauteur du lit consolidé.
- Arrêtez la pompe, ouvrez la sortie de la pièce supérieure, fermez la sortie de la pièce inférieure, desserrez légèrement la bague d'étanchéité, appuyez sur la surface en caoutchouc selon le taux de compression de 1.15, serrez la bague d'étanchéité, fermez la sortie et complétez le garniture de colonne.
3.2 Évaluation de l'emballage
- Testez l'efficacité de la colonne pour vérifier la qualité du garnissage. Les tests sont nécessaires après le garnissage de la colonne, pendant la durée de vie de la colonne et lorsque les performances de séparation et de purification sont détériorées. La méthode d'expression de l'efficacité d'une colonne à garnissage est en termes de hauteur équivalente à un plateau théorique (HETP) et de facteur d'asymétrie (As).
- L'acétone ou le NaCl peuvent être utilisés comme sample pour le test. SampLa solution et le tampon d'éluant peuvent être préparés selon le tableau suivant.
Méthode à l'acétone Méthode NaCl Sample 1.0 % (v/v) d'acétone dans l'eau NaCl 0.8 M dans l'eau chargement 1.0 %CV 1.0 %CV Amortissement Eau NaCl 0.4 M dans l'eau Le débit (Anglais) 30cm/heure 30cm/heure Surveiller UV280nm Conductivité - Méthode de mesure HETP et As :
Selon la courbe UV ou la courbe de conductivité pour calculer l'efficacité de la colonne (HETP), et l'asymétrie (As) :
HETP=L/N
N=5.54(VR/Wh)²
Remarque : VR = volume de rétention
Wh = largeur demi-pic
L = hauteur de colonne
N = le nombre de plateaux théoriques
(Les unités de VR et Wh doivent être les mêmes) As=b/a
Remarque :
a= 1ère demi-largeur de pic à 10 % de la hauteur du pic
b= 2e demi-largeur de pic à 10 % de la hauteur du pic - Évaluation du garnissage de la colonne À titre indicatif, si la valeur de HETP est inférieure à 3 fois la taille moyenne des particules (d50) de la résine et que l'As est compris entre 0.8 et 1.8, il est très efficace. Les résultats insatisfaisants doivent être analysés et la colonne doit être remballée.
3.3 Méthode chromatographique
- Sélection du tampon : Les sels tampons dont les groupes tampons n'agissent pas sur la résine doivent être sélectionnés. La solution tampon à faible teneur en sel (moins de 5 mS/cm) et à faible pH (généralement 1 unité de pH inférieure au point isoélectrique de la cible) doit être adoptée pour faciliter la combinaison des substances. Pendant ce temps, la stabilité de samples fichiers dans la solution tampon doivent être pris en compte. Les tampons d'élution sont généralement fabriqués en ajoutant une concentration élevée de sel (par exemple NaCl 1M) ou une élution à pH élevé pour équilibrer le tampon.
- Débit : selon le lit de colonne élevé pour utiliser le débit 100 ~ 300 cm/h, le lit de colonne supérieur haut et le débit inférieur.
- Sample préparation : Afin d'éviter le blocage de la colonne, le sample doit être filtré par membrane microporeuse de 0.45μm avant chargement, le pH et la conductivité du sample sont ajustés pour être cohérents avec le tampon d'équilibrage (le pH et la conductivité du samppeut être ajusté par dilution, ultrafiltration et dessalement avec Bestdex G-25).
- Équilibration : Lavage de la colonne avec un tampon d'équilibrage jusqu'à ce que le pH et la conductivité du tampon de sortie de la colonne soient fondamentalement les mêmes que le tampon d'équilibrage, qui nécessite généralement 3-5C V.
- Sampling : Le volume de chargement est déterminé en fonction de la teneur en substance dans le sample et la charge de reliure de Diamond SP Mustang.
- Rinçage : Laver la colonne avec un tampon d'équilibrage jusqu'à ce que la valeur d'absorption UV soit réduite à une valeur appropriée.
- Élution : un gradient linéaire ou un gradient par étapes peut être utilisé pour augmenter la force d'élution dans le tampon d'élution, en éluant des substances avec une force de liaison différente de la colonne de chromatographie, en collectant différents composants et en détectant l'emplacement de la cible.
- Régénération : Rincer la colonne avec une forte concentration de sel (ex : 2M NaCl)
- Rééquilibrage : après rinçage avec le tampon d'équilibrage, la deuxième sample fichier peut être chargé et répété.
Applications
L'agglutinine de germe de blé et la β-lactoglobuline ont été séparées par Diamond SP Mustang
Colonne : EzScreen 4.2 ml
Tampon d'équilibre : 20Mm HCOOH pH 4.0
Tampon d'élution : 20 mM HCOOH + 0.75 M LiCl pH 4.0
Sample : mélange WGA et β -lactoglobuline
Nettoyage en place (NEP)
Avec l'utilisation croissante de la résine de chromatographie, l'accumulation de contaminants sur la colonne de chromatographie augmente également. Le nettoyage en place peut empêcher l'accumulation de contaminants et maintenir un état de fonctionnement stable. Déterminer la fréquence du CIP en fonction du degré de contamination de la résine (si la contamination est grave, le CIP doit être effectué après chaque utilisation pour assurer la répétabilité des résultats).
Le CIP recommandé pour différents types d'impuretés et de contaminants est le suivant :
- 2 ~ 3CV de NaCl 2M ont été utilisés pour laver les protéines avec une liaison relativement étroite.
- Élimination des protéines hydrophobes fortes et des protéines précipitantes : nettoyer d'abord avec du NaOH 1 M de 2 ~ 3 CV, puis rincer immédiatement avec de l'eau pure à 5 ~ 10 CV.
- Élimination des lipoprotéines et des lipides : nettoyer d'abord avec de l'éthanol à 70 % ou de l'isopropanol à 30 % en volume de 5 ~ 10 CV, puis rincer à l'eau pure en volume de 5 ~ 10 CV.
- Les deux conditions de nettoyage ci-dessus peuvent également être combinées pour le nettoyage, à savoir une solution d'isopropanol à 30 % contenant 1 M de NaOH.
Remarque : L'éthanol à 70 % ou l'isopropanol à 30 % doit être dégazé avant utilisation. Dans le processus CIP, le débit peut être choisi entre 30 et 60 cm/h. Le rinçage inversé peut être utilisé lorsque le blocage est sérieux.
Stérilisation
Étant donné que la solution de conservation à 20 % d'éthanol avec 0.2 M de NaAc n'a pas de stérilisation ni de dépyrogénation, il est recommandé que Diamond SP Mustang puisse être traité avec du NaOH 1 M pendant plus de 0.5 à 1 h pour réduire le risque de contamination microbienne avant et pendant l'utilisation. Il peut également être autoclavé à 121 ℃ (50mM PB, pH7) pendant 30min.
Stockage
Diamond SP Mustang est fourni dans 20 % d'éthanol avec 0.2 M de NaAc ou 2 % d'alcool benzylique avec 0.2 M de NaAc. Il doit être stocké dans 20 % d'éthanol avec 0.2 M NaAc et scellé à 2-30 ℃ après utilisation, afin d'éviter la volatilisation de l'éthanol et la croissance microbienne, il est recommandé de remplacer 20 % d'éthanol par 0.2 M NaAc tous les 3 mois.
Élimination et recyclage
Le diamant SP Mustang est très difficile à dégrader dans la nature, l'incinération est recommandée pour protéger l'environnement.
Informations sur la commande
| Produit | Code No. | Taille du paquet |
| Diamant SP Mustang | AI0191 | 25mL |
| AI0192 | 100mL | |
| AI303211 | 500mL | |
| AI0193 | 1L | |
| AI0194 | 5L | |
| AI0195 | 10L | |
| AI303215 | 20L | |
| AI303216 | 40L |
| Colonnes préremplies | Code No. | Taille du paquet |
| EzFast SP Mustang | EI303251 | 5 × 1 ml |
| EI303203 | 1 × 5 ml | |
| EI303253 | 5 × 5 ml | |
| EzScreen SP Mustang | EI303202 | 1 × 4.2 ml |
| EI303252 | 5 × 4.2 ml | |
| EzLoad 16/10 SP Mustang | EI303204 | 1 pièces par boîte |
| EzLoad 26/10 SP Mustang | EI303206 | 1 pièces par boîte |
SMSAI019 V2.01
021-58953301
www.bestchrom.com
Documents / Ressources
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BESTCHROM Diamond SP Mustang Résine échangeuse de cations forte haute résolution [pdf] Mode d'emploi Diamond SP Résine échangeuse de cations forte haute résolution Mustang, Résine échangeuse de cations forte haute résolution Mustang, Résine échangeuse de cations forte résolution, Résine échangeuse de cations forte, Résine échangeuse de cations, Résine échangeuse, Résine |
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